Realizujemy część praktyczną kursów w ramach projektu "Kursy podnoszące kwalifikacje kadry medycznej udzielającej świadczeń zdrowotnych, w tym w związku z chorobą zakaźną, w szczególności COVID-19"
Biologia molekularna
Biologia molekularna
Temat 1
Izolowanie kwasów nukleinowych
Treści kształcenia
- Zapoznanie diagnostów laboratoryjnych z zasadami izolowania kwasów nukleinowych RNA i DNA pochodzenia ludzkiego, wirusowego, bakteryjnego oraz innego.
- Zapoznanie z rodzajami materiału biologicznego, z którego izolowane są kwasy nukleinowe.
- Zapoznanie z zasadami doboru materiałów do badań, w tym ocena ich przydatności.
- Omówienie i przygotowanie stanowiska pracy oraz potrzebnego sprzętu do wykonania działania.
- Omówienie poszczególnych etapów składających się na proces izolowania, w tym omówienie możliwych błędów przedanalitycznych i związanych z przeprowadzeniem oznaczenia.
- Omówienie różnic w manualnej oraz zautomatyzowanej izolacji materiału z wykorzystaniem minikolumny lub stacji do izolowania.
- Zabezpieczenie wyizolowanego kwasu nukleinowego na potrzeby dalszych analiz.
- Omówienie sposobów weryfikacji czystości i jakości wyizolowanych kwasów nukleinowych oraz metod oczyszczania.
45min
Temat 2
Reakcja real-time PCR z wykorzystaniem sond
Treści kształcenia
- Zapoznanie diagnostów laboratoryjnych z barwnikami niespecyficznymi oraz różnymi typami sond, które są wykorzystywane w reakcji real-time PCR. Wskazanie wad i zalet dostępnych na rynku aparatów do real time PCR.
- Przedstawienie metodyki przeprowadzania reakcji PCR-wybór rodzaju fluorochromu, sond, temperatury etapów, liczby cykli.
- Przedstawienie możliwości korzystania z genetycznych baz danych, w tym internetowych.
- Szacowanie ryzyka ujawnienia się chorób genetycznych w oparciu o predyspozycje rodzinne i wpływ czynników środowiskowych.
- Zapoznanie z możliwościami wykorzystania techniki real-time PCR w analizie jakościowej, ilościowej oraz genotypowaniu.
- Omówienie stanowiska pracy przygotowanego na potrzeby wykonania zadania oraz potrzebnego sprzętu i wykorzystywanych odczynników, z uwzględnieniem rodzaju flurochromu użytego do wyznakowania sondy, wykrywanych genów, czułości metody i możliwych do uzyskania wyników dla próby badanej, kontroli pozytywnej oraz kontroli negatywnych.
- Omówienie poszczególnych etapów składających się na przygotowanie mieszaniny do reakcji PCR, a następnie przygotowanie prób do reakcji zgodnie z przygotowaną przez prowadzącego instrukcją.
- Omówienie profilu reakcji PCR zgodnie z instrukcją zawartą w wykorzystywanym zestawie (temperatury etapów, liczba cykli, co zachodzi w każdym z etapów, kiedy następuje odczyt fluorescencji) i zaprogramowanie analizatora.
- Nastawienie reakcji real-time PCR z uwzględnieniem potrzebnych kontroli.
45min
Temat 3
Interpretacja wyników
Dla uczestników przygotowanych jest minimum 10 wyników wraz z instrukcją producenta
zestawu, który wykorzystano w celu uzyskania wyniku lub opisem przypadku lub instrukcją
techniczną i procedurą laboratoryjną. Przygotowane wyniki są przydzielane losowo uczestnikom
szkolenia. Jeden wynik omawia jedna osoba biorąca udział w części praktycznej kursu na forum
pozostałych osób.
Treści kształcenia
Treści kształcenia
- Analiza „surowych danych” z analizatorów: wyznaczanie wartości Ct, ocena wydajności reakcji, weryfikacja kontroli pozytywnej, kontroli negatywnych oraz kontroli wewnętrznej (IC).
- Wartość Ct w analizie jakościowej real-time PCR oraz w analizie ilościowej real-time PCR (qPCR).
- Zasady sporządzania krzywej standardowej do oceny ilościowej.
- Omówienie źródeł błędów.
- Analiza wyników (raportów z badań).
- Omówienie zasad i programów kontroli zewnątrz i wewnątrzlaboratoryjnej w obszarze diagnostyki molekularnej.
45min
